FBS(Fetal Bovine Serum;ウシ胎児血清)の評価方法: 信頼性を確保しましょう

FBSは細胞培養において重要な要素であり、製造元やロットによって品質に差異があるため、評価が不可欠です。この記事では、FBSの評価方法について説明し、増殖曲線とコロニー形成率を通じて品質を確保する手順を紹介します。

1. FBSの評価の重要性:

• なぜ評価が必要か: FBSは生物学的な製品であり、品質の変動があるため、評価を行うことは細胞培養の信頼性を確保するために不可欠です。
• 検定サンプルの取得: さまざまなテスト用サンプルを業者から提供してもらい、評価に使用します。
  
  

2. 増殖曲線による評価:

• 手順:
  1. 各血清を2倍濃度含む基礎培地を調整します。
  2. 1mlずつを35mmディッシュに分注し、インキュベータに入れておきます。
  3. 細胞をトリプシン処理し、中和にはFBS以外の血清を使用します。
  4. 細胞を遠心分離し、細胞数を数えます。
  5. 細胞を所望の密度（例：3-5×10^4細胞/ml）になるように培地で希釈し、ディッシュに分注します。
  6. 1日ごとに細胞数を数えます。
     
     

3. コロニー形成率による評価:

• 手順:
  • Feeder細胞が必要な場合:
    1. 各血清を2倍濃度含む培地を調整します。
    2. 2.5mlずつを60mmディッシュに分注し、インキュベータに入れておきます。
    3. 細胞にX線を照射します（5000R）。
    4. 照射後、細胞をトリプシン処理し、中和にはFBS以外の血清を使用します。
    5. 細胞を遠心分離し、細胞数を数えます。
    6. 細胞を希釈します（例：2-3×10^4細胞/1.5ml）。
    7. ディッシュに分注します。
  • Feeder細胞が必要でない場合:
    1. 各血清を2倍濃度含む培地を調整します。
    2. 1.5mlずつを60mmディッシュに分注し、インキュベータに入れておきます。
    3. 細胞をトリプシン処理し、中和にはFBS以外の血清を使用します。
    4. 細胞を遠心分離し、細胞数を数えます。
    5. 細胞を希釈します（例：150-300細胞/ml）。
    6. ディッシュに分注します。
    7. 培養後、固定染色し、コロニー形成率を評価します。

まとめ:

FBSの評価は、細胞培養の信頼性を確保するために不可欠です。増殖曲線とコロニー形成率による評価を通じて、品質を確保しましょう。

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