抗体の作製方法: 免疫学の基本手法

抗体はB細胞が産生・放出するタンパク質で、体内に侵入した病原体などの異物に結合し、生体内の異物への防御において重要な役割を果たします。本記事では、抗体の作製方法に焦点を当てて解説します。

セクション 1：動物を用いた抗体の作製方法

１．ポリクローナル抗体作製法:

【抗体作製時に採用される免疫動物】

    マウス、ウサギの他に、ラット、ハムスター、モルモット、ニワトリ、ヤギ、ヒツジ、ロバなど　　　　　　　　　
    様々な哺乳動物や鳥類が免疫動物として使用されています。

    同じ脊椎動物であっても、B細胞の遺伝子構造や多様性、産生される臓器の違いは
    種によって異なり、抗体のアイソタイプも異なります。

２．ハイブリドーマ法:

　　抗体を産生しているB細胞をひとつだけ取り出し、培養・増殖することにより、モノクローナ　　
　　ル抗体を半永久的に得ることが可能です。
　　抗体を産生しているB細胞と不死化したがん細胞(ミエローマ)を人工的に融合させ、
　　特定の抗体遺伝子を維持し、半永久的に生存できる融合細胞(ハイブリドーマ)を作成します。
　　ハイブリドーマの中から、特に結合親和性や特異性に優れたモノクローナル抗体を産生する細
　　胞を選択します。
　　動物に抗原を注射してからモノクローナル抗体を得るまでに基本４か月から半年ほどかかりま
　　す。

３．トランスジェニックマウス法:

内因性 Ig のノックアウトマウスにヒトIg 遺伝子を導入し、マウス抗体の代わりにヒト抗体が産生することができ、完全ヒト抗体を作製することができます。

セクション 2：動物を用いない抗体の作製方法

１．ファージディスプレイ法:

バクテリアファージの表面に抗体の結合能を決めるH鎖とL鎖の可変領域を短いアミノ酸配列で
繋いで抗体ファージライブラリーを提示させ、標的分子とファージを反応させ、標的分子に結合し
たファージを回収し、大腸菌感染によるファージライブラリの複製・増殖するパニング操作を行
い、標的の特定的な抗体を取得し、配列決定する方法です。
*バクテリアファージとは細菌(バクテリア)に感染するウイルス。バクテリアのみに感染するため、人間の細胞には感染しません。

２．単一B細胞抗体クローニング法

感染症などの患者からなる標的抗原を用いて、抗原を特異的に認識する抗体を発現するB細胞を単離し、単一細胞から抗体遺伝子をクローニング、発現ベクターを動物細胞に導入して抗体を発現させてスクリーニングし、目的の抗体遺伝子をクローニングする方法です。

結論:

• 抗体の作製はポリクローナル抗体作製法、ハイブリドーマ法、ファージディスプレイ法など複数の手法があり、それぞれの特徴や応用が存在します。
• 精製技術は抗体の品質や応用性に大きな影響を与えるため、慎重な手法の選択と実施が重要です。

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